Die DNA wurde isoliert und ein spezieller Bereich, das Cytochrom-b-Gen, vervielfältigt.
Die vervielfältigte DNA bzw. das Cytochrom-b-Gen wird nun mittels Restriktionsenzymen an den Restriktionsschnittstellen gespalten.
Wir verwenden heute das Restriktionsenzym Tsp509I aus dem Bakterium Thermus spezies, ein ebenfalls hitzeliebendes Bakterium. Das Enzym schneidet an der Erkennungssequenz „AATT“. Dabei entstehen überhängende Enden, sogenannte „sticky ends“.
Nun können wir mit der Restriktionsspaltung starten. Du findest das Protokoll wieder oben links in der Ecke.
| Geeignete DNA | aRFLP-Methode | Ablauf | DNA-Extraktion | PCR | Restriktionsspaltung | Gel gießen | Gelelektrophorese | Gel färben |